Протоколи (Лютого 2020)

Використання підвищеного плюсу лабіринту як аналіз тривожної поведінки гризунів

Використання підвищеного плюсу лабіринту як аналіз тривожної поведінки гризунів

Анотація Підвищений плюс лабіринт є широко застосовуваним поведінковим аналізом для гризунів, і він був перевірений для оцінки антитривожних ефектів фармакологічних препаратів та стероїдних гормонів, а також для визначення областей мозку та механізмів, що лежать в основі поведінки, пов’язаної з тривогою. Коротко кажучи, щурів або мишей розміщують на стику чотирьох рук лабіринту, звернених до відкритої руки, а записи / тривалість у кожній руці фіксуються системою відеоспостереження та спостерігачем одночасно протягом 5 хв. Також можуть спостерігатися інші етоло

Генерування визначеної та рівномірної популяції попередників ЦНС та нейронів із ембріональних стовбурових клітин миші

Генерування визначеної та рівномірної популяції попередників ЦНС та нейронів із ембріональних стовбурових клітин миші

Анотація Описаний детальний протокол, що дозволяє генерувати по суті чисті популяції глутаматергічних нейронів із клітин ембріональних стовбурів (ES) миші. Він заснований на культурі клітин ES, які зберігаються недиференційованими шляхом багаторазового розщеплення і згодом ампліфікуються як неадекватні клітинні агрегати. Лікування ретиноєвою кислотою призводить до того, що ці клітини ES по суті стають нейронними прародителями з характеристиками радіальних гліальних клітин, позитивних Pax6. Як і в умовах in vivo , ці потомники диференціюються в глютаматергічних пірамідальних нейронах, які у

Виправлення: стандартизований протокол для повторного соціального стресового ураження у мишей

Виправлення: стандартизований протокол для повторного соціального стресового ураження у мишей

Оригінальна стаття була опублікована 21 липня 2011 року Нат. Протокол. 6 , 1183–1191 (2011); doi: 10.1038 / nprot.2011.361; опубліковано в мережі 21 липня 2011 року; виправлено після друку 17 грудня 2014 року У первинно опублікованій версії цієї статті була певна плутанина щодо тлумачення речення "Далі, поразки слід проводити під постійною ветеринарною оцінкою та з повним схваленням усіх необхідних інституційних оглядових комісій та стандартів". Для додаткової ясності, вирок було змінено так, щоб читати "Далі, поразки повинні бути запущені з повним затвердженням усіх необхідних і

Аналіз на цитокінез-блокування мікронуклеусів

Аналіз на цитокінез-блокування мікронуклеусів

Ця стаття була оновлена Анотація Аналіз на цитокінез-блокування мікронуклеусів на мікронуклеус - це комплексна система для вимірювання пошкодження ДНК, цитостазу та цитотоксичності. Події пошкодження ДНК оцінюються спеціально в одноразово розділених двоярусних клітинах (BN) і включають (a) мікроядра (MNi), біомаркер розриву хромосоми

Включення для флуоротирозинів специфічних для ділянки R2 субодиниці рибонуклеотидної редуктази E. coli шляхом експресованої перев'язки білка

Включення для флуоротирозинів специфічних для ділянки R2 субодиниці рибонуклеотидної редуктази E. coli шляхом експресованої перев'язки білка

Анотація Експресія білкового перев’язування (EPL) дозволяє напівсинтезувати цільовий білок із специфічним для місця включення зондів або неприродних амінокислот на його N або C кінці. Тут ми описуємо протокол, розроблений нашою лабораторією для включення флуоротирозинів (F n Ys) в залишку 356 малої субодиниці Escherichia coli ribonuc

Виправлення: Аналіз кількості копій, що стосується геном, поодиноких клітин

Виправлення: Аналіз кількості копій, що стосується геном, поодиноких клітин

Оригінальна стаття була опублікована 03 травня 2012 року Нат. Протокол. 7 , 1024–1041 (2012); опубліковано в мережі 3 травня 2012 року; виправлено після друку 24 лютого 2016 року У первісно опублікованій версії цієї статті одиниці концентрації NaCl в буфері NST, описані в розділі Настройка реагентів, були неправильними. Правильна одиниця повинна бути mM. Помилка була виправлена ​​у HTML та PDF версіях статті. Автори Шукати Тімур Баслана: Журнали природознавства • PubMed • Google Scholar Шукати Джуда Кендала у: Журнали природознавства • PubMed

Високопропускний аналіз in vivo на мікронуклеус для скринінгу нестабільності геному у мишей

Високопропускний аналіз in vivo на мікронуклеус для скринінгу нестабільності геному у мишей

Предмети Пошкодження та відновлення ДНК Проточна цитометрія Геномна нестабільність Миша Анотація Ми описуємо чутливий, надійний, високопропускний метод кількісного визначення утворення мікроядер, маркерів нестабільності геному, в еритроцитах миші. Мікронуклеї - це цілі хромосоми або сегменти хромосом, які були відокремлені від ядра. Інші методи виявлення покладаються на трудомісткі методи, засновані на мікроскопії. Тут ми описуємо 2-д, 96-лунковий планшетний

Скринінг активності субстрату (SAS): загальна процедура підготовки та скринінгу бібліотеки субстратів на основі пептидної протеази на основі фрагмента для виявлення інгібіторів

Скринінг активності субстрату (SAS): загальна процедура підготовки та скринінгу бібліотеки субстратів на основі пептидної протеази на основі фрагмента для виявлення інгібіторів

Анотація Скринінг активності субстрату (SAS) - це фрагментарний метод швидкого розвитку нових субстратів та їх перетворення в непептидні інгібітори протеаз Cys і Ser. Метод складається з трьох етапів: (i) перевіряється бібліотека N- ацилових амінокумаринів з різноманітними, низькомолекулярними N -ацильними групами для ідентифікації субстратів протеаз, використовуючи простий аналіз на основі флуоресценції; (ii) ідентифіковані субстрати N -ацил-амінокумарину оптимізовані шляхом швидкого синтезу та оцінки аналогів; та (iii) оптимізовані субстрати перетворюються на інгібітори шляхом прямої заміни а

Первинна культура бичачих хромафінових клітин

Первинна культура бичачих хромафінових клітин

Анотація Цей протокол описує первинну культуру окремих хромафінових клітин, отриману ферментативним травленням з надниркового мозку надниркової залози великої рогатої худоби. Починаючи з кінця 1970-х років, такі клітини забезпечували корисну модельну систему для вивчення біосинтезу нейромедіаторів, зберігання та вивільнення

Аналізи на основі біосенсорів для сигнальних молекул PQS, HHQ та споріднених 2-алкіл-4-хінолонових сигналів молекули кворуму

Аналізи на основі біосенсорів для сигнальних молекул PQS, HHQ та споріднених 2-алкіл-4-хінолонових сигналів молекули кворуму

Анотація 2-алкіл-4-хінолони (AHQ), такі як 2-гептил-3-гідрокси-4-хінолон (PQS) та 2-гептил-4-хінолон (HHQ) - молекули сигналу кворування. Тут ми описуємо методи виявлення AHQ, орієнтовну ідентифікацію та кількісне визначення, в яких використовується штам AHQ біосенсора Pseudomonas aeruginosa AHQ. Протокол описує хроматографію на тонкошаровій хроматографії (ТШХ) та мікропланшотні аналізи, які використовують біолюмінесценцію або зелений колір піоціаніну як кінцеві точки виявлення. Екстрак

Кількісний аналіз тестів на захоплення конформації хромосом (3C-qPCR)

Кількісний аналіз тестів на захоплення конформації хромосом (3C-qPCR)

Анотація Технологія захоплення хромосомної конформації (3С) - це новаторська методологія, яка дозволяє досліджувати геномну організацію in vivo у масштабі, що охоплює від кількох десятків до кількох сотень кілобазових пар. Розуміння складання геному в цій шкалі особливо важливо для ссавців, де в регуляції генів беруть участь дисперсні регуляторні елементи, такі як підсилювачі або ізолятори. Технолог

Генерація безклітинних екстрактів яєць Ксенопуса та демебранованого хроматину сперми для збирання та виділення in vitro утворених ядер для вестерн-блот та скануючої електронної мікроскопії (SEM)

Генерація безклітинних екстрактів яєць Ксенопуса та демебранованого хроматину сперми для збирання та виділення in vitro утворених ядер для вестерн-блот та скануючої електронної мікроскопії (SEM)

Анотація Цей протокол детально описує способи отримання безклітинних екстрактів та шаблонів ДНК з яйцеклітин та хроматину сперми відповідно когтячої жаби Xenopus laevis . Ми використовували цю систему зі скануючою електронною мікроскопією (SEM), як детально описано у цьому документі, для аналізу біохім

Отримання геномів від некультивованих мікроорганізмів навколишнього середовища за допомогою одноклітинної геноміки на основі FACS

Отримання геномів від некультивованих мікроорганізмів навколишнього середовища за допомогою одноклітинної геноміки на основі FACS

Предмети Екологічна мікробіологія Проточна цитометрія Геноміка Ампліфікація цілого генома Анотація Одноклітинна геноміка є потужним інструментом для вивчення генетичного складу мікроорганізмів навколишнього середовища, переважну більшість з яких важко, якщо не неможливо, культивувати за допомогою сучасних підходів. Тут ми представляємо вичерпний протокол отримання геномів з некультивованих екологічних мікробів за допомогою високопропускної одноклітинної ізоляції за допомогою FACS. Протокол охоплює збереження та попередню обробку різних зразків навколишнього середовища з подальшим фізичн

Індукований колагеном артрит

Індукований колагеном артрит

Анотація Модель миші, викликана колагеном (ЦРУ), є найбільш вивченою аутоімунною моделлю ревматоїдного артриту. Аутоімунний артрит індукується в цій моделі шляхом імунізації емульсією повного ад'юванта Фрейнда та колагену типу II (ІСІ). Цей протокол описує етапи, необхідні для придбання, обробки та підготовки ІПСШ, а також відбору штамів миші, правильну техніку імунізації та оцінку частоти та тяжкості артриту. Як правило, перші

Генерація церебральних органоїдів з плюрипотентних стовбурових клітин людини

Генерація церебральних органоїдів з плюрипотентних стовбурових клітин людини

Предмети Розвиток нервової системи Нейрогенез Неврологічні моделі Диференціація стовбурових клітин Анотація Розвиток мозку людини демонструє кілька унікальних аспектів, таких як збільшення складності та розширення виходу нейронів, які виявилися важкими для вивчення в модельних організмах. Як результат, підходи in vitro для моделювання розвитку мозку та захворювань мозку є інтенсивним напрямком досліджень. Тут ми описуємо нещодавно створений протокол генерації тривимірної тканини мозку, так звані церебральні органоїди, що тісно імітує е

Помилка: Аналіз зв'язаних частинок переохолодженої круглої ДНК за допомогою ручок пептидної нуклеїнової кислоти

Помилка: Аналіз зв'язаних частинок переохолодженої круглої ДНК за допомогою ручок пептидної нуклеїнової кислоти

Оригінальна стаття була опублікована 21 серпня 2014 року Нат. Протокол. 9 , 2206–2223 (2014); doi: 10.1038 / nprot.2014.152; опубліковано в мережі 21 серпня 2014 року; виправлено після друку 12 вересня 2014 року У первісно опублікованій версії цієї статті джерело, з якого були адаптовані рисунки 2, 4, 8 та 9, не було вказано та зафіксовано правильно. Помилка була виправлена ​​у HTML та PDF версіях статті. Автори Шукати Каміллу Норрегард у: Журнали природознавства • PubMed • Google Scholar Шукати Магнуса Андерссона у: Журнали природознавства • PubMed • Google Scholar Шук

Комплексний аналіз мононуклеарних фагоцитів сітківки сітківки

Комплексний аналіз мононуклеарних фагоцитів сітківки сітківки

Предмети Нейроімунологія Сітківка Анотація Вроджена імунна система активізується при ряді дегенеративних та запальних розладів сітківки, таких як вікова дегенерація макули (AMD). Мікроглія сітківки, хороїдальні макрофаги та набрані моноцити, спільно названі "мононуклеарними фагоцитами сітківки", є критичними визначал

Розробка, валідація та реалізація спорідненості іммобілізованих металів для аналізу високопропускної здатності на основі фосфохімічних речовин (IMAP) для бібліотек з низькою молекулярною масою

Розробка, валідація та реалізація спорідненості іммобілізованих металів для аналізу високопропускної здатності на основі фосфохімічних речовин (IMAP) для бібліотек з низькою молекулярною масою

Анотація Цей протокол описує розроблення, валідацію та реалізацію автоматизованого спорідненості іммобілізованого металу до фосфохімічних (IMAP) флуоресцентної поляризації (FP) та високочастотного скринінгу флуоресцентного резонансного перенесення енергії (TR-FRET) для ідентифікації низькомолекулярні інгібітори кінази. Обидві процедури проводяться в об'ємах реакції мініатюризованої кінази і передбачають поетапне додавання тестових або контрольних сполук, ферменту та субстрату / АТФ. Реакції кінази припиняють подальшим додаванням IMAP-зв'язуючого буфера. Описані атрибути ана

Виправлення: нанокаталізатори на основі кобальту для процесів окислення та гідрування зеленого кольору

Виправлення: нанокаталізатори на основі кобальту для процесів окислення та гідрування зеленого кольору

Оригінальна стаття була опублікована 21 травня 2015 року Нат. Протокол. 10 , 916–926 (2015); опубліковано в мережі 21 травня 2015 року; виправлено після друку 16 вересня 2015 року У первісно опублікованій версії цієї статті, поле 1 мала неправильну назву; правильна назва: "Експерименти з переробки каталізатора нітробензолом: 30 год." Помилка була виправлена ​​(як для самого поля, так і для відповідного запису в розділі "Терміни") у версіях HTML та PDF статті. Автори Шукати Rajenahally V Jagadeesh у: Журнали природознавства • PubMed • Google Scholar Пошук